NUTRICION HUMANA Y METABOLISMO. (Continuación...)

Análisis de sangre

El suero recolectado para determinar el tamaño de la partícula LDL, LDL oxidado, insulina y ß-hidroxibutirato se almacenó inmediatamente a –80º C. El suero restante fue analizado por glucosa, colesterol total, colesterol HDL y TAG usando técnicas automatizadas (Roche Modular; Roche Diagnostics, Indianápolis, IN) con valores de precisión calculados de <3%. Del colesterol total se calcularon las concentraciones de colesterol LDL y VLDL, colesterol HDL y TAG (18). De manera enzimática se determinó en ayunas las concentraciones de ß-hidroxibutirato en suero por duplicado usando un kit comercialmente disponible (#310ª; Sigma Diagnostic, St. Louis, MO) y análisis espectrofotométrico (Spectronic 601; Milton Roy, Rochester NY). El ensaye de CV fue del 0.9%. Se determinó por duplicado las concentraciones de insulina en plasma postprandial y en suero en ayunas usando el kit ELISA con sensibilidad del 1.81 pmol/L (#10-1600; Diagnostics Systems Laboratory, Webster, TX). El intraensaye y el interensaye CV fue de 5.5% y 3.2% respectivamente. El LDL oxidado en ayunas también se determinó por duplicado usando el ensaye inmune absorbente vinculado con enzima (American Laboratory Products Company; Windham, NH) con ensaye inmune de enzima de dos sitios que se basa en la técnica de sándwich directo en dos anticuerpos monoclonales y dirigido en contra de determinantes antigénicos en la molécula B de poliproteína oxidada. El intraensaye CV fue del 7.9%. Las lecturas de las absorbencias se realizaron en un contador multi-etiqueta (Wallac 1420 Victor 2 ; Wallac Ov, Turku. Finlandia).

Subclases LDL

La separación de las subclases de LDL se realizó usando electrofóresis de gel de poliacrilamida sin gradiente (Lipoprint LDL System; Quantimetrix, Redondo Beach CA), que se describió previamente en detalle (20,21). Para la electrofóresis se utilizaron tubos de gel de poliacrilamida de alta resolución al 3%. Se evaluaron 7 bandas de LDL usando un programa de computación (NIH Imaging Software usando Lipoprint LDL System de Quantimetrix), que divide la imagen en gel digitalizada en los valores Rf designados identificados por su movilidad relativa.

Esto se basa en las diferencias del tamaño de la partícula (partículas más pequeñas migran mas lejos) y se calcula el área bajo la curva para cada fracción. Reportamos el porcentaje relativo de colesterol LDL en cada banda y el diámetro medio y pico de la partícula. El diámetro pico de la partícula para el fenotipo A generalmente es >25.5 nm, en contraste con el pico mayor para el fenotipo B que usualmente es <25.5 nm (22). La determinación de la muestra caracterizada como fenotipo A o B se basa en las tasas de migración de LDL y se describe en detalle en Hoefner y colaboradores (20).

Sensibilidad a la insulina

Debido a que las dietas con alto contenido de grasas se han estado asociando con la resistencia a la insulina, nosotros calculamos la sensibilidad a la insulina usando el análisis del modelo homeostasis usando concentraciones de insulina y glucosa en ayunas (23). Asumiendo que un sujeto con peso normal con una edad <35 años y con una resistencia a la insulina de 1, los valores del sujeto se pueden evaluar a partir de las concentraciones de insulina y glucosa mediante la formula: resistencia a la insulina (cercano a la aproximación) = insulina / 22.5e -In glucosa ).

Análisis estadístico

Las medias y las desviaciones estándar para todas las variables se calcularon con métodos convencionales. Se obtuvieron dos muestras en ayunas para cada variable sanguínea y la media de estos dos valores se usó para el análisis estadístico. Se usaron mediciones repetidas ANOVA de dos vías para evaluar los cambios con el paso del tiempo en el grupo cetogénico y en el grupo de control. Cuando se logró un valor F significativo, se utilizó la prueba de diferencia menos significativa de Fisher para ubicar las diferencias con respecto al par entre las medias. El área total (concentración en suero a través del tiempo) bajo la línea que conecta TAG postprandial y respuestas a la insulina se calculó usando el método trapezoidal. El cambio en el peso corporal se utilizó como covariable en todos los análisis. Se examinaron las interrelaciones entre las variables usando el coeficiente de correlación momento-producto de Pearson. Se utilizó el criterio de nivel-a de P </= 0.05 para todas las comparaciones estadísticas.

RESULTADOS

Masa corporal e ingesta dietética

Todos los ingredientes dietéticos fueron significativamente diferentes cuando los hombres consumieron la dieta cetogénica comparado con su dieta habitual, con excepción de consumo de energía dietética y alcohol ( Tabla 1 ). Las proteínas, grasas y colesterol de la dieta tuvieron una cantidad significativamente mayor y la cantidad de carbohidratos en la dieta fue significativamente menor (8% del total de la energía) durante el periodo con la dieta cetogénica. No se presentaron cambios significativos en la ingesta de nutrientes en el grupo de control de la semana o a la 6. Se presentó una pequeña pero significativa disminución en la masa corporal en el grupo de la dieta cetogénica (-2.2±1.7 kg) pero no en el grupo de control (+0.4± 4.1 kg).

Tabla 1

Ingesta diaria de energía y nutrientes en hombres que cambiaron de su dieta habitual a una dieta cetogénica por 6 semanas y el grupo de control continuó consumiendo su dieta habitual por 6 semanas 1 .