Investigación original

COMPARACIÓN DE UNA DIETA MUY BAJA EN CARBOHIDRATOS Y BAJA EN GRASAS SOBRE LOS LÍPIDOS, SUBCLASES LDL, RESISTENCIA A LA INSULINA EN AYUNAS Y RESPUESTA LIPÉMICA POSTPRANDIAL EN MUJERES CON SOBREPESO. (Continuación...)

Recolección de sangre en ayunas

Las muestras de sangre se obtuvieron en dos días separados antes y después de cada dieta experimental de 4 semanas. Las muestras se obtuvieron después de un ayuno nocturno y abstinencia de alcohol y ejercicio pesado durante 24 horas. Los sujetos se reportaron al laboratorio entre las 7 y las 9 AM, descansaron rápidamente por 10 minutos en posición supina y la muestra se obtuvo de la vena antecubital en un tubo recubierto con un gel de silicón. La sangre se separó por centrifugación a 1500 x g por 15 minutos a 4ºC.

Prueba oral de tolerancia a la grasa

Se realizó una prueba oral de tolerancia a la grasa después de cada dieta experimental usando procedimientos estándar en nuestro laboratorio (9-11). Los sujetos llegaron al laboratorio después de 12 horas de ayuno nocturno y abstinencia de alcohol y ejercicio pesado durante 24 horas. Se insertó un catéter flexible en la vena del antebrazo y las muestras de sangre se obtuvieron de una llave de paso de 3 vías conectada en la punta del catéter. La sangre se recolectó con una jeringa y se transfirió al tubo cubierto con gel de silicón para procesarlo como antes para la determinación de triacilglicerol. El catéter se mantuvo con una gota salina constante. Los sujetos descansaron en posición supina por 10 minutos y se obtuvieron dos muestras de sangre al inicio separadas por 10 minutos. Luego se consumió la comida de prueba (150 mL de crema, pudín sin azúcar, 5 mL de aceite de canola, 28.5 g de nuez de macadamia). Esta comida proporcionó 867 kcal, 13% carbohidratos, 3% proteína, 84% grasa, 38 g grasa saturada, 33 g grasa monoinsaturada, 4 g grasa poliinsaturada y 207 mg de colesterol. Se obtuvieron inmediatamente muestras de sangre postprandial después de la comida y cada hora por un total de 8 horas. Los sujetos descansaron calladamente sentados y consumieron exactamente un litro de agua durante el período postprandial de 8 horas.

Determinación de lípidos en suero, LDL oxidado, glucosa e insulina

Después del procesamiento, el suero recolectado para la determinación de insulina, tamaño de partícula LDL y LDL oxidado (oxLDL) se almacenó inmediatamente a -80ºC. El suero restante (~3 mL) se envió a un laboratorio médico certificado (Quest Diagnostics, Wallingford, CT) para la determinación de glucosa, colesterol total HDL-C y concentración de triacilglicerol usando procedimientos enzimáticos automatizados (Olympus America Inc., Melvilla, NY). Para calcular LDL-C se usó la fórmula Friedewal (LDL-C = colesterol total – (HDL-C + triacilgliceroles/5) (14). LDL-C oxidado en ayunas se determinó por duplicado usando un ensaye inmuno-sorbente unido a enzimas (American Laboratory Products Company, Windham, NH) que se basa en la técnica de sándwich directa en la cual dos anticuerpos monoclonales están dirigidos contra determinantes antigénicos separados en la molécula apolipoproteína B oxidada (15). El coeficiente de varianza intra ensaye fue 7.9%. Se determinó la concentración de insulina en suero en ayunas por duplicado usando un kit ELISA con una sensibilidad de 1.8 pmol/L (#10-1600, Diagnostic Systems Laboratory, Webster, TX). El coeficiente de varianza intra ensaye fue 5.5%. Las absorbancias se leyeron en un contador multinivel (VersaMax, Molecular Devices, Sunnyvale, Calif.). Para estimar la resistencia a la insulina se usó la evaluación del modelo de homeostasis (HOMA) usando la fórmula: glucosa (mmol/L) • [insulina (mU/L)/22.5] (6). Los sujetos con peso normal de menos de 35 años tuvieron una resistencia a la insulina de 1 (16).

La determinación del tamaño de partícula de lipoproteína se hizo mediante electroforesis de gel de poliacrilamida no gradiente (Lipoprint LDL System, Quantimetrix Co., Redondo Beach, Calif.). El método se describió en detalle en una publicación reciente de nuestro laboratorio (10) y otros (17) y se validó contra la electroforesis de gel de poliacrilamida no desnaturalizada y espectroscopia de resonancia magnética nuclear (18). Se evaluaron cuantitativamente 7 bandas de LDL, 3 bandas de IDL y VLDL utilizando software de computadora (software NIH de imagen, utilizando Lipoprint LDL macro). La imagen de gel escaneada se dividió a los valores RF designados identificados por su movilidad relativa, la cual se basa en el tamaño de partícula (las partículas más pequeñas emigran más rápido). Para cada fracción se calcula el área bajo la curva. También se reporta el porcentaje de LDL, IDL y VLDL en cada banda y diámetro de partícula LDL media y pico. Basándose en la distribución de subclases LDL, los sujetos se clasificaron ya sea como Patrón A (predominancia de partículas LDL grandes) o Patrón B (predominancia de partículas LDL pequeñas).

Análisis estadístico

Todos los análisis estadísticos se hicieron con software Statistica, Versión 5.5 (StatSoft Inc. Tulsa, OK). La media para colesterol total, HDL-C, LDL-C y triacilgliceros en suero en ayunas se calcularon de muestras en ayunas obtenidas en cada punto de tiempo y se usaron para el análisis estadístico. Para evaluar los valores después de cada dieta, se usó la comparación de pruebas t apareada (dos colas). El área total bajo la curva de triacilglicerol (AUC) se calculó de valores individuales obtenidos durante prueba oral de tolerancia a la grasa usando el método trapezoidal. El nivel alfa para la significancia se estableció en 0.05.

Tabla 1. Consumo diario de energía y nutrientes 1

1 valores como media±SD; n=13

* p=0.05 vs valor bajo en grasa

Los análisis realizados en 7 días de registros dietéticos al inicio y a los 21 días durante las dietas muy bajas en carbohidratos y bajas en grasa.